蛋白表達(dá)量的測(cè)定注意事項(xiàng)
日期：2023-09-03 16:48:06
蛋白表達(dá)量的測(cè)定是蛋白質(zhì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)中非常重要的一步，下面是蛋白表達(dá)量測(cè)定的注意事項(xiàng)：
采用合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)：選擇適合表達(dá)目標(biāo)蛋白的蛋白表達(dá)系統(tǒng)非常重要，常用的表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母等。在選擇表達(dá)系統(tǒng)的時(shí)候需要考慮表達(dá)量、純度、易于操作等方面因素。
平衡表達(dá)量和細(xì)胞生長(zhǎng)速度：表達(dá)目標(biāo)蛋白時(shí)，過高的表達(dá)量容易導(dǎo)致細(xì)胞毒性增加，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，降低蛋白質(zhì)產(chǎn)量。因此，平衡表達(dá)量和細(xì)胞生長(zhǎng)速度是很重要的。
合適的收獲時(shí)間：蛋白表達(dá)量通常與表達(dá)時(shí)間相關(guān)，必須選擇合適的收獲時(shí)間。收獲時(shí)間過早，表達(dá)量可能不足；收獲時(shí)間過晚，目標(biāo)蛋白質(zhì)可能被降解、稀釋或錯(cuò)誤折疊等。
正確的蛋白提取方法：蛋白質(zhì)提取方法應(yīng)根據(jù)表達(dá)系統(tǒng)和目標(biāo)蛋白質(zhì)特點(diǎn)選擇，常用方法包括直接裂解法、溶解-重結(jié)晶法以及針對(duì)膜蛋白的特殊提取方法等。
準(zhǔn)確測(cè)量蛋白質(zhì)濃度：準(zhǔn)確測(cè)量蛋白質(zhì)濃度是蛋白表達(dá)量測(cè)定的前提。常用方法包括BCA、 Bradford、Lowry等。需要注意測(cè)定時(shí)需要減少潛在的干擾物質(zhì)和誤差。
使用合適的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：使用合適的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)可以使蛋白表達(dá)量的測(cè)定更加準(zhǔn)確。例如，采用外源蛋白作為內(nèi)校準(zhǔn)，或采用多個(gè)獨(dú)立的蛋白樣品進(jìn)行數(shù)據(jù)校驗(yàn)。
在蛋白表達(dá)量測(cè)定過程中還需要遵守實(shí)驗(yàn)室的操作規(guī)范，保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。
