免疫組織化學(xué)檢測(cè)蛋白表達(dá)方法
日期：2023-09-28 15:14:57
免疫組織化學(xué)（IHC）是常用的檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)的方法，它可以通過與特異性抗體結(jié)合來(lái)標(biāo)記目標(biāo)分子，并將其在組織切片的位置可視化。以下是IHC檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)的基本步驟：
取得組織樣本：收集需要檢測(cè)的組織樣本并制作成切片。通常使用的包括組織芯片或冰凍切片等。
抗原修復(fù)：為了在切片上準(zhǔn)確顯示蛋白質(zhì)分布，需要進(jìn)行抗原修復(fù)處理，以恢復(fù)蛋白質(zhì)在組織中的三維構(gòu)象?？乖迯?fù)方法包括可以使用高壓加熱、微波爐加熱或酶解等。
阻斷非特異性結(jié)合：為了減少假陽(yáng)性信號(hào)，需要對(duì)切片進(jìn)行阻斷非特異性結(jié)合物的處理，通常使用牛血清白蛋白（BSA）、奶粉或其他可以阻止蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的物質(zhì)。
應(yīng)用初級(jí)抗體：將與目標(biāo)蛋白專一結(jié)合的初級(jí)抗體滴于切片上，并在適當(dāng)?shù)臈l件下孵育，使其與細(xì)胞或組織中的目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。
應(yīng)用二級(jí)抗體：將標(biāo)記有酶或熒光素等檢測(cè)標(biāo)記的二級(jí)抗體加入切片中來(lái)檢測(cè)初級(jí)抗體的結(jié)合情況。常見的標(biāo)記物包括辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP），它們能夠催化底物的轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生可見的信號(hào)，如顏色或光信號(hào)。
顯色：根據(jù)使用的檢測(cè)標(biāo)記類型，在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行顯色，產(chǎn)生可視化的信號(hào)。例如：使用DAB作為底物，HRP可以將其氧化為可見的棕色沉淀。
洗滌：在處理完切片后，需要對(duì)其進(jìn)行清潔處理，以去除未結(jié)合的抗體和標(biāo)記物，最后制備步驟后可以通過鏡檢觀察組織切片上特定位置的顏色或熒光信號(hào)，推斷某些蛋白是否表達(dá)。
這是一般IHC的基本步驟，不同的實(shí)驗(yàn)室和試劑盒可能會(huì)有所不同，具體的操作指南應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和試劑盒的說(shuō)明書。
