sec外泌體提取試劑盒步驟
日期：2023-05-19 11:31:32
SEC (Size Exclusion Chromatography) 是一種常用的外泌體分離方法，可以將不同大小的外泌體進行分離，從而提取純凈的外泌體。以下是一般SEC外泌體提取試劑盒步驟：
1、樣品處理：首先應(yīng)該選擇一個合適的細胞培養(yǎng)基或體液來收集樣品，離心去除細胞碎片、細胞核等雜質(zhì)，然后將樣品保存在-80℃的冰柜中。
2、試劑準備：將試劑盒中的緩沖液等試劑按照說明書的要求配制好。注意保證試劑的新鮮度和純度。
3、樣品稀釋：將冰凍的樣品緩緩化解，在適當(dāng)?shù)臈l件下進行均勻分散。
4、樣品上清分離：將上述稀釋后的樣品采用離心管進行離心，去除細胞碎片和非細胞完整體，留下上清液。
5、上清液過篩：將上清液通過0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾，以去除殘留的大顆粒物。
6、SEC柱裝置：在SEC柱中填充固定相樹脂，并預(yù)先平衡樹脂至平衡緩沖液條件下。
7、樣品加載：將經(jīng)過過篩的樣品通過裝置好的SEC柱進行加載，注意保證樣品不超過SEC柱承載能力。
8、沖洗收集：使用平衡緩沖液對SEC柱進行沖洗，收集出流液。
9、上樣清洗液回收：收集每個分數(shù)管中的上樣清洗液，并使用RNA提取試劑盒進行RNA提取。
SEC法外泌體提取試劑盒操作相對簡單，而抽提的外泌體更純凈，可以應(yīng)用于RNA、蛋白質(zhì)以及其他生物分子的研究。需注意SEC法對外泌體數(shù)量有一定的限制，可在實驗過程中進行優(yōu)化、改進。
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