晚期氧化蛋白產(chǎn)物AOPPs elisa檢測(cè)方法

日期：2023-05-19 13:13:32

晚期氧化蛋白產(chǎn)物（Advanced oxidation protein products，AOPPs）是由堿性淀粉酶和次氯酸反應(yīng)后形成的一組含有羰基和蛋白質(zhì)交聯(lián)的氧化蛋白產(chǎn)物。AOPPs在許多疾病的發(fā)病和進(jìn)展中扮演著重要角色，如糖尿病、高血壓、腎病、動(dòng)脈硬化等。因此，對(duì)AOPPs的檢測(cè)和分析具有重要的醫(yī)學(xué)和生物學(xué)價(jià)值。

本文將介紹一種常見(jiàn)的AOPPs檢測(cè)方法——ELISA法。

1、AOPPs ELISA檢測(cè)原理

AOPPs ELISA檢測(cè)主要利用抗AOPPs抗體或AOPPs結(jié)合蛋白，以間接ELISA法為基礎(chǔ)，通過(guò)檢測(cè)樣品中AOPPs和標(biāo)準(zhǔn)曲線上的AOPPs濃度的關(guān)系來(lái)計(jì)算樣品中AOPPs的濃度。

具體的檢測(cè)步驟如下：

步驟1：制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將不同濃度的AOPPs溶液分別加入到孔板中，經(jīng)過(guò)一定的反應(yīng)時(shí)間后，使用檢測(cè)抗體或配體與其結(jié)合。再加入發(fā)色底物，使已結(jié)合的檢測(cè)抗體或配體轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的顏色。利用光度計(jì)在450nm處進(jìn)行讀數(shù)，繪制AOPPs標(biāo)準(zhǔn)曲線。

步驟2：樣品處理

樣品中的蛋白質(zhì)需要去除。以人類(lèi)血清、尿液等作為檢測(cè)對(duì)象，將樣品加入孔板中，使用特定的試劑對(duì)其進(jìn)行處理，如添加巰基乙酸、生理鹽水等緩沖液進(jìn)行稀釋、洗滌等處理，最終獲取清晰的樣品。

步驟3：檢測(cè)AOPPs濃度

將處理好的樣品加入經(jīng)過(guò)預(yù)包被的酶標(biāo)板孔道中，接著加入檢測(cè)抗體或配體，使其與AOPPs結(jié)合，再加入發(fā)色底物，使已結(jié)合的檢測(cè)抗體或配體轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的顏色。利用光度計(jì)在450nm處進(jìn)行讀數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果可以計(jì)算出樣品中的AOPPs濃度。

2、AOPPs ELISA檢測(cè)的優(yōu)缺點(diǎn)

AOPPs ELISA檢測(cè)方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：

（1）靈敏度高：AOPPs濃度在0.5-10μmol/L范圍內(nèi)線性關(guān)系好，檢測(cè)靈敏度高。

（2）專屬性強(qiáng)：該方法可以特異性地識(shí)別和檢測(cè)AOPPs，無(wú)需應(yīng)用其他檢測(cè)方法作為驗(yàn)證。

（3）試劑盒易購(gòu)買(mǎi)：市面上有多種AOPPs ELISA試劑盒可供選擇，使用方便，不需要加入額外試劑，操作簡(jiǎn)便。

AOPPs ELISA檢測(cè)方法也存在以下缺點(diǎn)：

（1）價(jià)格昂貴：AOPPs ELISA試劑盒價(jià)格較高，尤其是進(jìn)口試劑盒，費(fèi)用較大。

（2）誤差源多：AOPPs樣品處理、讀數(shù)等步驟容易產(chǎn)生誤差，需要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件。

（3）過(guò)程復(fù)雜：AOPPs ELISA檢測(cè)需要對(duì)樣品進(jìn)行一系列處理，過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，在檢測(cè)時(shí)間和精度上具有一定局限性。

AOPPs ELISA檢測(cè)方法是一種較為經(jīng)典的AOPPs檢測(cè)方法。它主要通過(guò)抗體或配體與樣品中的AOPPs結(jié)合，再利用發(fā)色底物使其轉(zhuǎn)化為顏色，最終通過(guò)光度計(jì)對(duì)其讀數(shù)，計(jì)算樣品中AOPPs的濃度。該方法具有靈敏度高，專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但需要注意誤差源多、過(guò)程相對(duì)復(fù)雜等局限性。因此，在實(shí)驗(yàn)操作上需要嚴(yán)格控制各步驟的條件，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。