1. 什么是重組抗體？

由于單克隆抗體藥物在臨床應(yīng)用中的缺點(diǎn)，抗體治療一直沒有取得理想的效果。然而，隨著對抗體基因結(jié)構(gòu)和功能以及分子生物學(xué)的進(jìn)一步了解，科學(xué)家們開發(fā)出了一種新型抗體--重組抗體。

重組抗體又稱基因工程抗體，是一種利用合成抗體基因在體外生產(chǎn)的單克隆抗體。這些合成抗體基因通過 DNA 重組技術(shù)進(jìn)行修飾和重組形成，構(gòu)建在質(zhì)粒上，然后轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。不同的是，單克隆抗體是通過雜交瘤技術(shù)在活體動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的。重組抗體的特點(diǎn)是重現(xiàn)性高、特異性強(qiáng)和可擴(kuò)展性好。

2. 分類

2.1 嵌合抗體

從鼠特異性單克隆抗體中克隆的可變區(qū)（V）與人抗體的常量區(qū)（C）結(jié)合形成嵌合基因，將其插入表達(dá)載體，然后在原核或真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)。由此產(chǎn)生的抗體就是嵌合抗原。它具有良好的親和力和特異性，因?yàn)樗Ａ袅诵∈髥慰寺】贵w的完整 V 區(qū)。去除小鼠單克隆抗體的 C 區(qū)后，小鼠蛋白的含量大大降低，從而在一定程度上減少了抗小鼠抗體的產(chǎn)生。但由于小鼠單克隆抗體 V 區(qū)的存在，人鼠嵌合抗體仍會(huì)引起抗 V 區(qū)抗體反應(yīng)。

2.2 人源化抗體

人源化抗體是由 CDR 嫁接基因?qū)⑷嗽纯贵w的 CDR（互補(bǔ)決定區(qū)）置換成小鼠單克隆抗體的 CDR 而產(chǎn)生的。它在很大程度上保留了母體小鼠單克隆抗體的親和力和特異性。其人源化比例可達(dá) 80%-90%，大大降低了異源抗體對人體造成的免疫副作用。

2.3 完全人源化抗體

通過轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體技術(shù)將人類抗體基因轉(zhuǎn)入抗體基因缺陷動(dòng)物體內(nèi)。動(dòng)物表達(dá)的人類抗體達(dá)到完全人源化。利用動(dòng)物基因敲除和插入技術(shù)獲得的完全人源化抗體操作困難，成本高昂。而且還會(huì)引起人體排斥反應(yīng)，因此噬菌體展示技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。

2.4 小分子抗體

所謂抗體就是全長抗體，包括輕鏈和重鏈的全長。由于全長抗體分子的分子量相對較大，在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常會(huì)遇到組織滲透性差、易降解等問題。為了解決這些問題，科學(xué)家們開發(fā)了抗體片段，如 Fab 片段、單鏈可變片段（scfv）、單域抗體（sdab）等。

這些片段因分子量小、穿透力強(qiáng)、抗原性低、可在原核系統(tǒng)中表達(dá)、易于基因工程操作等特點(diǎn)而受到越來越多的關(guān)注。它們可以與抗原結(jié)合，也可以相互結(jié)合形成雙特異性抗體，還可以與酶類、生物素、熒光素、同位素、藥物、毒素或細(xì)胞因子等適當(dāng)物質(zhì)結(jié)合。它們適用于臨床診斷、共軛導(dǎo)向治療以及抗原抗體結(jié)合位點(diǎn)的 X 射線晶體衍射分析。

* 抗原結(jié)合片段（Fab 片段）

經(jīng)木瓜蛋白酶處理后，兔 IgG 在核心鉸鏈處被裂解，產(chǎn)生兩個(gè)相同的 Fab 和一個(gè)完整的 Fc。Fab 片段保留了抗原結(jié)合區(qū)，分子量為抗體全長的三分之一。同時(shí)，由于缺少 Fc 片段，它的免疫原性較低，常被用作指導(dǎo)藥物載體和開發(fā)。

* 單鏈可變片段（scfv）

scfv 是抗體 V 區(qū)的單鏈片段，由抗體重鏈和輕鏈的 V 區(qū)通過多肽連接體連接而成。由于 scfv 保留了全長抗體的 V 區(qū)，因此其抗原結(jié)合位點(diǎn)不會(huì)改變，仍具有良好的結(jié)合特異性。此外，scfv 的多肽連接體還可根據(jù)需要設(shè)計(jì)成其他金屬螯合位點(diǎn)和連接藥物，因此是臨床應(yīng)用的有力工具。

* 多價(jià)抗體

多價(jià)抗體是結(jié)合多種抗原的抗體。目前比較受關(guān)注的是“雙特異性抗體”，它是一種含有兩個(gè)特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)的人工抗體，能在靶細(xì)胞和功能分子之間架起一座橋梁，從而產(chǎn)生定向效應(yīng)作用。

3. 生產(chǎn)

重組抗體的生產(chǎn)可分為五個(gè)步驟：抗體基因庫的構(gòu)建、噬菌體展示、抗體的分離、分離抗體的修飾以及在細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)系統(tǒng)中擴(kuò)大所選抗體的生產(chǎn)規(guī)模。

3.1 構(gòu)建抗體基因庫

抗體基因庫是由不同抗體的可變重（VH）和可變輕（VL）基因轉(zhuǎn)化而成的微生物集合。V 區(qū)基因可以在體外生成，也可以從產(chǎn)生人類抗體的 B 細(xì)胞的遺傳物質(zhì)中擴(kuò)增。

3.2 噬菌體展示

噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，由包裹在蛋白質(zhì)外層的 DNA 或 RNA 基因組組成。它們含有“外來”DNA 片段，并在大腸桿菌中復(fù)制。噬菌體展示不同于傳統(tǒng)的表達(dá)系統(tǒng)，它是將外源基因序列拼接到噬菌體外殼蛋白中，使外源氨基酸序列與外殼蛋白的內(nèi)源氨基酸進(jìn)行基因融合，產(chǎn)生雜合融合蛋白。

在噬菌體展示平臺(tái)上，抗體 V 區(qū)基因通常與編碼噬菌體表面蛋白的基因融合，并以融合蛋白的形式呈現(xiàn)在噬菌體表面。改造后的噬菌體感染細(xì)菌，載體和噬菌體共同破壞細(xì)菌的正?；顒?dòng)，使細(xì)菌細(xì)胞開始產(chǎn)生新的噬菌體，新噬菌體含有抗體基因，并在表面顯示功能性抗體片段。當(dāng)雜交蛋白從細(xì)胞中釋放出來時(shí)，雜合蛋白就會(huì)融入噬菌體顆粒或病毒顆粒中，在表面顯示外來肽或蛋白結(jié)構(gòu)域。

3.3 分離抗體

一旦顯示出重組抗體，就可以使用順磁珠、熒光激活細(xì)胞分選（FACS）或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）來分離與特定抗原靶標(biāo)結(jié)合的單個(gè)抗體。將感興趣的抗原與顯示抗體的微生物孵育，丟棄不與抗原結(jié)合的重組抗體。將結(jié)合的 rAb 從抗原上移除，篩選出所需的特征。

3.4 分離抗體的改造

對有前景的抗體進(jìn)行大量培養(yǎng)，然后再次篩選出性能最高的候選抗體。如果候選抗體的親和力不夠強(qiáng)，則可通過隨機(jī)或合理誘變的方法使抗體“成熟”?？贵w親和力成熟是一個(gè)在體內(nèi)自然發(fā)生的過程。研究人員利用類似的體外過程來生產(chǎn)重組抗體。分子生物學(xué)技術(shù)，如定點(diǎn)誘變、易錯(cuò) PCR、DNA 洗牌或細(xì)菌突變菌株，可用于突變特定抗體片段的選定殘基，從而產(chǎn)生全新的文庫，并對其進(jìn)行功能增強(qiáng)測試。

3.5 選定抗體的放大生產(chǎn)

一旦選定了所需的抗體，抗體基因就會(huì)通過表達(dá)載體轉(zhuǎn)移到表達(dá)系統(tǒng)中--一種專門設(shè)計(jì)用于表達(dá)外來蛋白質(zhì)的細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。載體和表達(dá)系統(tǒng)的選擇取決于要生產(chǎn)的抗體類型。

全長抗體的表達(dá)最常見于酵母和哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)。細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)速度快、成本低，但主要用于表達(dá)片段。

4. 優(yōu)勢

與傳統(tǒng)抗體相比，重組抗體具有不可抗拒的優(yōu)勢，這也是其逐漸興起的原因之一。

4.1 高度一致性和可重復(fù)性

由于重組抗體是由一組特定的基因產(chǎn)生的，因此抗體的產(chǎn)生是可控的，理論上可以構(gòu)建針對任何抗原的重組抗體。同時(shí)，還可以避免雜交瘤引起的基因缺失、基因突變和細(xì)胞系漂移等問題。因此，批次與批次之間的差異非常小，結(jié)果的可重復(fù)性很高。

4.2 高靈敏度和特異性

使用重組技術(shù)，抗體特異性和靈敏度更容易通過抗體工程得到提高。在雜交瘤和重組克隆階段，我們就可以選擇所需的克隆，從而篩選出最優(yōu)質(zhì)的抗體。

4.3 生產(chǎn)周期短

建立抗體庫后，重組抗體的生產(chǎn)周期可短至 8 周。

4.4 無動(dòng)物免疫

從合成或人類抗體庫中提取的重組抗體完全是非動(dòng)物技術(shù)。這就解決了與傳統(tǒng)單克隆抗體生產(chǎn)相關(guān)的動(dòng)物倫理問題（動(dòng)物免疫、安樂死和腹水雜交瘤擴(kuò)增）。

4.5 同工型轉(zhuǎn)換

重組抗體的序列可根據(jù)具體需要進(jìn)行修改。一旦找到所需的抗體片段，通過添加適當(dāng)?shù)暮愣ńY(jié)構(gòu)域，就可以很容易地將其轉(zhuǎn)換為任何物種的任何抗體同種型。

不過，我們也需要認(rèn)識到，重組抗體的生產(chǎn)存在一些障礙，如抗體產(chǎn)量較低，需要訓(xùn)練有素、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員。由于重組抗體生產(chǎn)的復(fù)雜性和密集型高技術(shù)，大多數(shù)科學(xué)家需要從外包公司獲得。

5. 應(yīng)用

抗腫瘤： 重組抗體因其對腫瘤的靶向性和獨(dú)特的生物效應(yīng)，主要用于肝癌和血液系統(tǒng)腫瘤?？贵w作為導(dǎo)向分子，在靶點(diǎn)富集效應(yīng)細(xì)胞和免疫激活因子，從而發(fā)揮殺傷作用。

抗病毒感染： 最新研究表明，人源化抗體在治療肝炎、艾滋病和其他呼吸道病毒感染方面顯示出強(qiáng)大的優(yōu)勢。目前，針對狂犬病毒、流感病毒和巨細(xì)胞病毒的人源化抗體也處于實(shí)驗(yàn)階段。

抗老年癡呆癥： 阿爾茨海默?。ˋD）是一種難治性神經(jīng)退行性疾病，目前尚無明確的治療或預(yù)防方法?？茖W(xué)家已經(jīng)證實(shí)，β 淀粉樣蛋白（Aβ）在腦組織中的積累是導(dǎo)致老年癡呆癥病理過程的關(guān)鍵。目前研究表明，Aβ低聚物對改善認(rèn)知障礙或清除腦內(nèi)Aβ斑塊具有一定的治療潛力，具有AD免疫治療的應(yīng)用前景。

抗自身免疫疾?。?/b> 重組抗體藥物可以抑制過度的免疫病理反應(yīng)，防止炎癥細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子的釋放。使用抗體治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和多發(fā)性硬化癥效果顯著。

此外，具有抗凝血和抗血小板功能的重組抗體制劑在治療心腦血管疾病方面也發(fā)揮著重要作用。

總之，重組抗體是傳統(tǒng)抗體不斷優(yōu)化的產(chǎn)物，它既具有單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)，又彌補(bǔ)了單克隆抗體的不足。隨著科技的進(jìn)步和創(chuàng)新，科學(xué)家們將會(huì)了解更多的重組抗體技術(shù)，最大限度地挖掘重組抗體藥物的潛力，使其更廣泛地應(yīng)用于相關(guān)疾病的預(yù)防和治療。