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  4. Recombinant DT3C (Diphtheria toxin & spg 3C domain) for Antibody Internalization Assay (Active)

Recombinant DT3C (Diphtheria toxin & spg 3C domain) for Antibody Internalization Assay (Active)

In Stock
  • 貨號(hào)：
    CSB-EP360556CQR1
  • 規(guī)格：
    ￥2328
  • 圖片：
    • (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.
    • Activity
      After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CHOK1/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU2). The ED50 is 0.3708-0.5608 μg/ml. Biological Activity Assay
    • Activity
      After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CT26/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU3). The ED50 is 0.4661-0.8614 μg/ml. Biological Activity Assay
  • 其他：

產(chǎn)品詳情

  • 純度：
    Greater than 90% as determined by SDS-PAGE.Greater than 90% as determined by SEC-HPLC.
  • 內(nèi)毒素：
    Less than 1.0 EU/ug as determined by LAL method.
  • 生物活性：
    ①After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CHOK1/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU2). The ED50 is 0.3708-0.5608 μg/ml.②After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CT26/Human?CCR8?cells?(CSB-SC004847HU3). The ED50 is 0.4661-0.8614 μg/ml.
  • 基因名：
    DT3C
  • Uniprot No.：
  • 種屬：
    N/A
  • 蛋白長度：
    Linked Heterodimer
  • 來源：
    E.coli
  • 分子量：
    69.4 kDa
  • 蛋白標(biāo)簽：
    N-terminal?6xHis-tagged
  • 產(chǎn)品提供形式：
    Lyophilized powder
    Note: We will preferentially ship the format that we have in stock, however, if you have any special requirement for the format, please remark your requirement when placing the order, we will prepare according to your demand.
  • 緩沖液：
    Lyophilized from a 0.2 μm filtered PBS, 6% Trehalose, pH 7.4
  • 復(fù)溶：
    We recommend that this vial be briefly centrifuged prior to opening to bring the contents to the bottom. Please reconstitute protein in deionized sterile water to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL.We recommend to add 5-50% of glycerol (final concentration) and aliquot for long-term storage at -20℃/-80℃. Our default final concentration of glycerol is 50%. Customers could use it as reference.
  • 儲(chǔ)存條件：
    Store at -20°C/-80°C upon receipt, aliquoting is necessary for mutiple use. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  • 保質(zhì)期：
    The shelf life is related to many factors, storage state, buffer ingredients, storage temperature and the stability of the protein itself.
    Generally, the shelf life of liquid form is 6 months at -20°C/-80°C. The shelf life of lyophilized form is 12 months at -20°C/-80°C.
  • 貨期：
    Basically, we can dispatch the products out in 3-7 working days after receiving your orders. Delivery time may differ from different purchasing way or location, please kindly consult your local distributors for specific delivery time.
  • 注意事項(xiàng)：
    Repeated freezing and thawing is not recommended. Store working aliquots at 4℃ for up to one week.
  • Datasheet & COA：
    Please contact us to get it.

產(chǎn)品評(píng)價(jià)

平均分:
5.0分 - 4 個(gè)評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：抗體內(nèi)化實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品評(píng)價(jià)： 我購買了CSB-EP360556CQR1用于抗體內(nèi)化檢測(cè)，使用了CUSABIO推薦的實(shí)驗(yàn)流程，實(shí)驗(yàn)流程很詳細(xì)，服務(wù)也很周到。我用DT3C在不同的細(xì)胞中檢測(cè)，并顯示出不同的效果。我發(fā)現(xiàn)不同類型的細(xì)胞對(duì)DT3C的敏感度不同，其中一些細(xì)胞在抗體內(nèi)化測(cè)定中顯示出更好的結(jié)果。抗體內(nèi)化的效率與抗原密度、抗體親和力以及抗體和抗原結(jié)合表位密切相關(guān)。針對(duì)同一靶標(biāo)的不同抗體也會(huì)表現(xiàn)出不同的內(nèi)化效率。因此，建議在早期階段可以多測(cè)試幾個(gè)細(xì)胞。

By 張老師

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：抗體內(nèi)化實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品評(píng)價(jià)： 用CUSABIO的DT3C產(chǎn)品進(jìn)行抗體內(nèi)化效率檢測(cè)，與其他方法相比，其mAb-DT3C復(fù)合物制備簡單，且其抗體內(nèi)化效率高于Mab-ZAP，性價(jià)比較高。我們會(huì)再次購買。

By 何老師

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品評(píng)價(jià)： 我購買了DTC3重組蛋白用于雜交瘤細(xì)胞篩選，參考了某文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)流程，結(jié)果很理想。具體實(shí)驗(yàn)流程如下： 用DT3C對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選：取96孔板，向每個(gè)孔中加入4μg/mL的DT3C（25微升），然后加入得到的雜交瘤的培養(yǎng)上清液（25微升），混勻后在室溫下孵育30分鐘。將NOR-P1細(xì)胞以2 x 10^5細(xì)胞/mL的濃度（RPMI培養(yǎng)基，含10%低IgG FBS (+)）接種，然后在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后通過顯微鏡觀察，確定粘附細(xì)胞數(shù)約為使用陰性對(duì)照抗體時(shí)粘附細(xì)胞數(shù)的25%或更少的孔為陽性。將選定的克隆進(jìn)行一個(gè)或兩個(gè)亞克隆步驟，以建立8個(gè)單克隆雜交瘤細(xì)胞系。

By 何老師

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問答及客戶評(píng)論

■ 常見問題解答
Q:

請(qǐng)給我們關(guān)于處理這個(gè)產(chǎn)品重組DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1）的建議，推薦的生物安全級(jí)別（BSL）是多少？

A:
該蛋白不具有傳染性或致病性，可以像常規(guī)蛋白一樣正常運(yùn)輸。如果您只是將此蛋白用于普通實(shí)驗(yàn)或檢測(cè)，BSL-1可以滿足需求。如果您的實(shí)驗(yàn)需要無菌操作，則需要BSL-2級(jí)別。
Q:

我對(duì)你們的產(chǎn)品DT3C重組蛋白用于抗體內(nèi)化檢測(cè)很感興趣，想知道這對(duì)于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是否有效？

A:
我們目前尚未進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。如果您有興趣，我們可以提供一個(gè)小樣本供您測(cè)試。
Q:

如果在孵育DT3C和抗體時(shí)，存在無血清培養(yǎng)基，是否會(huì)影響它們的結(jié)合？

A:
您可以使用無血清培養(yǎng)基或PBS。因?yàn)檠逯泻蠭gG，IgG將會(huì)與DT3C結(jié)合。
Q:

DT3C蛋白能夠檢測(cè)ADC藥物抗體的內(nèi)吞效率嗎？

A:
DT3C蛋白主要用于與候選抗體結(jié)合，模擬ADC藥物抗體，并檢測(cè)候選抗體的內(nèi)吞效率。然而，ADC藥物抗體本身具有誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)吞的功能，因此ADC藥物抗體的內(nèi)吞效率不需要DT3C的輔助。
Q:

DT3C的有效濃度是多少？

A:
DT3C的有效濃度為1-4ug/ml，您可以參考以下步驟來確定最佳DT3C濃度和抗體濃度。
第一步：固定抗體濃度（過量），拉DT3C梯度，確定最佳的DT3C殺傷濃度；
第二步：固定最佳的DT3C濃度，拉抗體梯度，確定最佳的抗體內(nèi)化濃度；
第三步：根據(jù)稀釋比例，將最佳的DT3C濃度和最佳的抗體濃度一起進(jìn)行測(cè)試。
Q:

DT3C和抗體的結(jié)合表位是什么？

A:
DT3C結(jié)合到抗體的Fc末端。
Q:

DT3C蛋白的特異性是什么（添加后對(duì)細(xì)胞的影響）？

A:
DT3C利用鏈球菌protein G的3C domain結(jié)合抗體的Fc，其結(jié)合特性與protein G結(jié)合抗體Fc相同。mAb-DT3C只有通過抗體和靶細(xì)胞之間的特異性結(jié)合內(nèi)化到細(xì)胞中時(shí)才會(huì)產(chǎn)生殺傷作用，DT3C本身在細(xì)胞外對(duì)細(xì)胞沒有毒性。
Q:

您是否檢查了您的重組DT3C產(chǎn)品在抗體內(nèi)化檢測(cè)中的生物活性？如果是的話，能否分享生物活性的驗(yàn)證數(shù)據(jù)？

A:
相關(guān)的活性測(cè)試仍在進(jìn)行中，因此我們目前無法提供測(cè)試結(jié)果供客戶參考，但我們可以結(jié)合我們目前的工作（文獻(xiàn)和產(chǎn)品COA）給予一些建議和參考資料。
DT3C使用鏈球菌蛋白G的3C區(qū)域來結(jié)合抗體的Fc。其結(jié)合特性與結(jié)合蛋白G的抗體Fc相同。它可以結(jié)合到多種物種的IgG（包括人類、小鼠、兔子、山羊等），還可以結(jié)合到多種亞型（IgG1/2/3/4等），但其特定的結(jié)合強(qiáng)度（親和力）尚未測(cè)試。
理論上，一個(gè)抗體可以結(jié)合到兩個(gè)DT3C（DAR=2），但可能存在不均勻性，也可能與具體的抗體相關(guān)。目前暫未測(cè)試具體數(shù)值，因此建議在早期階段探索最佳的耦合比。
首先可以固定抗體濃度為10ug/ml（過量），然后探索DT3C的梯度（0-10ug/ml），確定最佳的DT3C殺傷濃度，然后固定最佳的DT3C濃度，并將mAb拉到梯度中測(cè)試抗體的內(nèi)化效率。目前，我們已經(jīng)收到一些客戶的反饋，大部分測(cè)試結(jié)果較好，但也有一些不行，分析與細(xì)胞類型有關(guān)。如果有DT3C背景殺傷，可能是細(xì)胞具有非抗體內(nèi)吞作用，因此建議在早期階段多測(cè)試幾個(gè)細(xì)胞。
以下圖片為我們DT3C的測(cè)試結(jié)果。
Q:

同樣作為ADC藥物抗體內(nèi)化檢測(cè)的工具，與Mab-ZAP相比，DT3C的優(yōu)勢(shì)是什么？

A:
DT3C與Mab-ZAP相比，在抗體藥物內(nèi)化效率方面具有以下三個(gè)優(yōu)勢(shì)： 首先，mAb-DT3C共軛物的制備簡單，僅需在室溫下孵育30分鐘即可形成，可在體外發(fā)揮患者接受的ADC藥物的功能；
其次，DT3C可以與來自不同物種（如人類、小鼠、兔子、山羊）的任何IgG結(jié)合，形成mAb-DT3C共軛物，從而進(jìn)一步擴(kuò)展DT3C作為檢測(cè)mAb抗體內(nèi)化的工具的適用范圍；
第三，只有當(dāng)mAb-DT3C共軛物被靶細(xì)胞內(nèi)化時(shí)，細(xì)胞的存活率才顯著降低。
值得一提的是，在有了DT3C之前，Mab-ZAP是唯一一種用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)mAb內(nèi)化效率的工具。Mab-ZAP由小鼠抗體和核糖體失活蛋白薩普霉素組成。當(dāng)mAb-Mab-ZAP共軛物被細(xì)胞內(nèi)化時(shí)，由于薩普霉素的毒性，細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。因此，通過細(xì)胞的存活率可以檢測(cè)mAb是否被細(xì)胞內(nèi)化。然而，Mab-ZAP本身可能在一定程度上減少mAb的內(nèi)化效率，因?yàn)镸ab-ZAP是含有抗小鼠抗體的大分子。與Mab-ZAP相比，mAb-DT3C共軛物的分子量穩(wěn)定且較小于mAb-Mab-ZAP。此外，相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，mAb-DT3C的內(nèi)化效率高于mAb-Mab-ZAP。
Q:

我們已經(jīng)訂購了1 mg的重組DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1），對(duì)測(cè)試結(jié)果非常滿意，我們希望批量訂購至少5 mg，是否有更多折扣？您是否有相同批號(hào)的現(xiàn)貨？如果沒有，交貨周期是多久？

A:
對(duì)于批量訂購，我們可以提供額外的折扣。這是我們的熱銷產(chǎn)品之一，目前沒有相同批號(hào)的現(xiàn)貨，但是在新批次的生產(chǎn)過程中，我們將嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，以確保批間差異盡可能小。目前我們有很多新批次的庫存，收到您的訂單后，我們可以在3-5個(gè)工作日內(nèi)發(fā)貨。
Q:

剛剛收到你們關(guān)于介紹DT3C用于抗體內(nèi)化檢測(cè)的郵件，想咨詢一下。我有一種類似于ADC的藥物，但連接體前面的所有部分都是合成的，可以用DT3C來檢測(cè)內(nèi)化以及內(nèi)化速率嗎？

A:
DT3C主要用于測(cè)量抗體的內(nèi)化效率，對(duì)于ADC類似物的內(nèi)化速率不適用。 CUSABIO的重組DT3C（白喉毒素和蛋白G 3C區(qū)域），包含沒有受體結(jié)合域的白喉毒素（DT）和鏈球菌蛋白G的C1、C2、C3（3C）區(qū)域。DT3C是一種有效的工具，用于檢測(cè)單克隆抗體（mAb）在Mab-ZAP處理后細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)化效率。有研究顯示，與mAb-Mab-ZAP相比，mAb-DT3C模擬了具有易于制備、分子量穩(wěn)定性和高抗體內(nèi)化效率等特點(diǎn)的抗體藥物聯(lián)結(jié)物（ADC）。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，DT3C已被用于近130個(gè)ADC藥物mAb篩選專利中，作為一種檢測(cè)細(xì)胞抗體內(nèi)化能力的工具。
Q:

DT3C是否只有BMK的殺傷效應(yīng)？

A:
在正常情況下，BMK-DT3C在發(fā)生細(xì)胞內(nèi)吞時(shí)會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，而其他mAb-DT3C如果能內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，也會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用。因?yàn)楫?dāng)它們被內(nèi)化到細(xì)胞中時(shí)，DT3C被細(xì)胞質(zhì)弗林蛋白酶切割，DT3C的催化結(jié)構(gòu)域釋放到細(xì)胞質(zhì)中，DT3C的催化結(jié)構(gòu)域?qū)е卵由煲蜃樱‥F）-2的ADP核糖基化，隨后通過抑制蛋白質(zhì)翻譯機(jī)制導(dǎo)致細(xì)胞毒性。