如何檢測(cè)寨卡病毒
日期:2016-02-02 08:45:34
2014年以來(lái)美洲多個(gè)國(guó)家相繼發(fā)生寨卡病毒(Zika)感染病例,世界衛(wèi)生組織近日警告,寨卡病毒正呈現(xiàn)“暴發(fā)式傳播”,預(yù)計(jì)美洲地區(qū)將有至多400萬(wàn)人感染這種病毒。截至目前,中國(guó)大陸尚未發(fā)現(xiàn)病例,但疾病預(yù)防控制中心指出我國(guó)仍存在病例輸入風(fēng)險(xiǎn)。
目前關(guān)于這種病毒傳播的疑問(wèn)不少,比如懷孕期間感染與造成嬰兒小頭畸形之間的關(guān)聯(lián),但由于目前診斷方法的局限性,還很難給出一個(gè)答案來(lái)。一組研究人員正在攻關(guān),希望能以最快的速度研發(fā)出免疫試劑,檢測(cè)是否感染Zika病毒。
來(lái)自德州大學(xué)加爾維斯頓醫(yī)學(xué)分校的Nikos Vasilakis表示,“我們正盡全力盡快給臨床醫(yī)師們一些答案。”
目前,檢測(cè)寨卡病毒的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法是對(duì)樣本進(jìn)行PCR,分析樣本中的病毒RNA探針是否存在,雖然這種方法能很好的檢測(cè)到病毒,但是病原體的RNA很快就會(huì)被降解掉。“在患者把樣品送入臨床時(shí),病毒也許已經(jīng)消失,或者只能抓住它的尾巴了,這超過(guò)了檢測(cè)時(shí)間限制,”Vasilakis說(shuō)。
臨床醫(yī)師和流行病學(xué)家希望能在出生前幾個(gè)月里就確定嬰兒是否感染了寨卡病毒,為此美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心CDC的科學(xué)家們進(jìn)行了一種稱為蝕斑減少中和試驗(yàn)(Plaque Reduction Neutralization Test) 的檢測(cè),這種方法是檢測(cè)血清中和抗體的一種敏感性較高的方法,能檢測(cè)之前的感染。
從原理上說(shuō),這一檢測(cè)方法以使蝕斑數(shù)減少50%的血清稀釋度作為其中的效價(jià)。試驗(yàn)使用定量的病毒(100PFU)與不同稀釋度的等量血清混合后感作, 接種預(yù)先準(zhǔn)備好的單層細(xì)胞,再覆蓋上營(yíng)養(yǎng)瓊脂置37度二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng),數(shù)天后分別統(tǒng)計(jì)蝕斑數(shù),用Karber法計(jì)算該血清的蝕斑中和效價(jià)。
患者的血清中混有病毒,幾天時(shí)間里研究人員觀察病毒是否會(huì)感染培養(yǎng)基,如果沒(méi)有,那么病毒就已經(jīng)被血清中的抗體中和了,這表明患者曾經(jīng)接觸過(guò)寨卡病毒。
CDC甲類病毒實(shí)驗(yàn)室主任Ann Powers表示,使用這種方法的問(wèn)題在于“你必須有活體病毒,和合適安全的環(huán)境,”這意味著只有少數(shù)幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室能進(jìn)行這種試驗(yàn)。
其它更加方便的血清學(xué)測(cè)試也能檢測(cè)特定病原體中的抗體,但是對(duì)于寨卡病毒來(lái)說(shuō),很難判斷患者攜帶的黃病毒是登革熱病毒,寨卡病毒還是其它病毒。“而且寨卡病毒出去的區(qū)域也正是登革熱出現(xiàn)的地區(qū),”來(lái)自華盛頓大學(xué)圣路易斯分校的免疫學(xué)家Mike Diamond說(shuō)。
Vasilakis 正在嘗試ELISA方法,也就是檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定的方法,這種方法利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測(cè)定,可以在感染后幾個(gè)星期內(nèi)檢測(cè)到Zika病毒。雖然這也有可能會(huì)與其它感染發(fā)生一定程度的交叉反應(yīng),但如果Zika病毒特異性抗體濃度高就能指示出近期發(fā)生的Zika病毒感染,Vasilakis說(shuō)。
Vasilakis預(yù)計(jì)在未來(lái)幾周內(nèi),Diamond研究組就會(huì)有結(jié)果,研發(fā)出一種針對(duì)Zika病毒的單克隆抗體檢測(cè)方法,這能與ELISA方法結(jié)合,檢測(cè)發(fā)生過(guò)的感染,“我們很早就開展了這項(xiàng)研究,這個(gè)月就能得到結(jié)果,”Diamond說(shuō),“初步結(jié)果表明我們的一些抗體能特異性識(shí)別Zika病毒。”
不過(guò)即使Diamond研究組的抗體能特異性檢測(cè)Zika病毒,他們也需要一些時(shí)間來(lái)建立診斷方法,“這可能還需要幾個(gè)月的時(shí)間。”
與此同時(shí),一些生物公司也開始銷售Zika血清學(xué)檢測(cè),比如MyBioSource 公司已經(jīng)有售一種針對(duì)Zika的IgM ELISA檢測(cè),來(lái)自加拿大的Biocan 公司也在出售一種檢測(cè)IgM和IgG抗體(后者比前者在感染后提升水平更高)的扎手指檢測(cè)方法,能在5到10分鐘得到結(jié)果。
Diamond表示他們還未接觸任何商業(yè)產(chǎn)品,Biocan目前還未給出有效數(shù)據(jù),但是其銷售部總經(jīng)理Bhavjit Jauhar表示他們已經(jīng)將實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果呈遞給巴西監(jiān)管當(dāng)局,“我們過(guò)去幾年間一直致力于Zika病毒的研究,因?yàn)槲覀冋J(rèn)為這種疫情會(huì)暴發(fā)。”