通過(guò)線(xiàn)性范圍來(lái)計(jì)算出實(shí)際的檢測(cè)樣本值，定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)R大于0.99。以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

ng/ml	OD1	OD2	Average	Corrected
100	2.839	2.897	2.868	2.718
50	1.968	1.974	1.971	1.821
25	1.144	1.192	1.168	1.018
12.5	0.709	0.733	0.721	0.571
6.25	0.433	0.450	0.441	0.291
3.125	0.303	0.301	0.302	0.152
1.562	0.242	0.223	0.233	0.083
0	0.149	0.151	0.150

樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測(cè)分析即為線(xiàn)性分析。線(xiàn)性是試劑盒準(zhǔn)確度和特異性的判定標(biāo)準(zhǔn)。為了評(píng)估測(cè)定的線(xiàn)性，在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品，并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的值的樣品。對(duì)每種經(jīng)驗(yàn)證樣品類(lèi)型進(jìn)行稀釋線(xiàn)性測(cè)試，如果結(jié)果是每種稀釋預(yù)期濃度的80%-120%，則視為良好。線(xiàn)性對(duì)于檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)分析物濃度的精確測(cè)量非常重要。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例：

血清樣品在1：100，1：200，1：400，1：800下稀釋。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液在,1：2， 1：4，1：8，1:16下稀釋。測(cè)試值在80-120％之間并顯示出良好的線(xiàn)性。

最低檢測(cè)限是靈敏度的測(cè)試指標(biāo)。由使用的抗體效價(jià)等決定的，在研發(fā)過(guò)程中，一般會(huì)優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測(cè)結(jié)果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測(cè)限越低，靈敏度越高。通過(guò)將零標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)獲得的平均 O.D. 加上3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)確定靈敏度。

CV (%) 或變異系數(shù)代表了測(cè)定的一致性，即同一樣本重復(fù)測(cè)定的符合程度。

一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對(duì)不同濃度的樣本進(jìn)行定量檢測(cè)，需要盡量降低批次差異帶來(lái)的系統(tǒng)誤差，保證相同樣本結(jié)果的重復(fù)性。

應(yīng)考慮兩種類(lèi)型的精度：批內(nèi)精確度和批間精確度。

批內(nèi)精確度：同一批次內(nèi)精密度測(cè)試方法：用低、中、高值待測(cè)樣本對(duì)同一批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測(cè)定20次(n)，計(jì)算該20次測(cè)量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計(jì)算變異系數(shù)(CV)，以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<8％。

批間精確度：不同批次間精密度測(cè)試方法：用低、中、高值待測(cè)樣本，對(duì)3個(gè)批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測(cè)定20次(n)，計(jì)算該20次測(cè)量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計(jì)算變異系數(shù)(CV)，以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<10％。

特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。CUSABIO選擇具有高特異性的原料，以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性，分析交叉反應(yīng)和干擾，確認(rèn)只能識(shí)別和檢測(cè)目標(biāo)分析物。

回收率=靶蛋白的測(cè)定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%

它反映了樣品分析過(guò)程中分析物的損失程度，回收率越高，準(zhǔn)確度越高。

回收實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)試劑盒是否受干擾因子的影響，以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對(duì)照，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素，ADP ELISA試劑盒）為例的回收率。

穩(wěn)定性越好，存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)。

通常采用加速降解的方法來(lái)推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月，實(shí)際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞4-7天后，然后檢測(cè)上述指標(biāo)，觀(guān)察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗(yàn)，來(lái)衡量有效期，對(duì)于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗(yàn)相結(jié)合的方法。

將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測(cè)定板在37℃下熱損傷測(cè)試7天，然后與在4℃下儲(chǔ)存的原料進(jìn)行比較。 7天后，OD值≤30％，這是合格的。部分試劑能經(jīng)受住60度高溫的熱損傷，最大程度的避免了長(zhǎng)途運(yùn)輸和保存過(guò)程中抗原抗體的失活。

避免使用有外源性污染的樣本，避免血樣本出現(xiàn)溶血、細(xì)菌污染，最好使用較新鮮樣本，避免反復(fù)凍融。

CUSABIO ELISA試劑盒可以檢測(cè)天然樣品，根據(jù)靶點(diǎn)性質(zhì)對(duì)天然樣本進(jìn)行選擇（血清，血漿、細(xì)胞上清等），為客戶(hù)提供最真實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考。

以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例，我們?cè)谥耙?：500稀釋度測(cè)試血清和血漿樣品，測(cè)試值為S3-S5。